211/223. Caracterización de un desorden nuevo de la sangría con tiempo que sangra prolongado aislado y de la deficiencia de la generación del microvesicle de la plaqueta. La actividad del prothrombinase de la plaqueta y la generación del microvesicle (milivoltio) fueron medidas en cuatro pacientes a partir de tres familias sin relación con un desorden de siempre que sangraba asociado a tiempo que sangraba levemente prolongado y a la consumición defectuosa aislada de la protrombina del suero, sin anormalidad de la función de la plaqueta o defecto del factor de von willebrand. La generación del milivoltio fue reducida en todos los pacientes o después de trombina más el colágeno o estímulo del ionophore del calcio A23187, mientras que, en desacuerdo con el síndrome de Scott, la actividad del prothrombinase era normal. Esta anormalidad constituye un nuevo desorden de la sangría, que proporciona nuevas penetraciones en el papel posible de los microvesicles de la plaqueta en salud y enfermedad. Además, los resultados de este estudio sugieren que la generación del milivoltio sea investigada en pacientes con una historia y una época que sangra prolongada al parecer aislada de la sangría en que la consumición de la protrombina en suero es defectuosa y el resto de las investigaciones son normales. ( info) |
212/223. Caracterización molecular de un desorden que sangra dominante heredado con respuestas deterioradas de la plaqueta al tromboxano a2. El tromboxano a2 (TXA2) es un metabilito importante del ácido araquidónico de plaquetas e induce funciones de la plaqueta atando a los receptores específicos en la membrana. Hemos encontrado a pacientes con los defectos hemostáticos debido a las respuestas deterioradas de la plaqueta a TXA2, y la caracterización molecular de los pacientes se ha realizado. Las plaquetas de estos dos pacientes sin relación demostraron respuestas deterioradas de la agregación a TXA2 y sus análogos a pesar de la respuesta normal a la trombina. Aunque el patients' las plaquetas exhibieron actividades obligatorias normales a los análogos TXA2, demostraron la actividad disminuida de GTPase y la segunda formación del mensajero cuando eran estimuladas por STA2, un agonista estable TXA2. Para entender la base molecular de esta anormalidad, determinamos la secuencia del cDNA del receptor TXA2 por la reacción en cadena reversa de la transcripción-polimerasa (RT-PCR) del patient' arn de la plaqueta de s, e identificado una sola substitución del aminoácido (Arg60 para el leu) en el primer lazo citoplásmico del receptor. Esta mutación fue encontrada en ambos isoforms del receptor de la plaqueta TXA2 que hemos encontrado recientemente: La alfa de TXR con la misma estructura que el receptor TXA2 y el TXR placentarios beta con la misma estructura que el receptor endotelial TXA2, y fue detectada exclusivamente en los miembros afectados de dos familias sin relación con el desorden. La alfa del mutante TXR y beta de TXR expresada en las células COS-m6 demostraron la activación agonista-inducida disminuida de la fosfolipasa C a pesar de sus afinidades obligatorias del ligand normal. Estos resultados sugieren que el Arg60 para la mutación del leu sea responsable del desorden e implican un papel crítico del primer lazo citoplásmico en la interacción del receptor TXA2 con la proteína de G. ( info) |
213/223. Mutaciones sin sentido del gene beta de Ib de la glicoproteína (GP) que deteriora la alfa del bus de interface de fines generales/el acoplamiento beta del disulfuro en una familia con desorden gigante de la plaqueta. Describimos aquí la base molecular de un desorden gigante hereditario aislado de la plaqueta (GPD) que no se acompañe con la inclusión de la trombocitopenia o del leucocito. La agregación de la plaqueta con ristocetin y botrocetin era casi normal en este paciente. El análisis cytometric del flujo demostró que el complejo de la glicoproteína (GP) Ib/IX fue expresado en las membranas de la plaqueta en los niveles disminuidos. La cantidad de alfa del bus de interface de fines generales de la plaqueta y la concentración del glycocalicin del plasma, la porción extracelular soluble en agua de alfa del bus de interface de fines generales, también fueron disminuidas. El anticuerpo alfa anti-Bus de interface de fines generales coprecipitó el bus de interface de fines generales beta y GPIX, aunque los cocientes de estos polipéptidos a la alfa del bus de interface de fines generales grandemente fueran disminuidos comparados con el cociente en plaquetas normales. El análisis de Immunoblot bajo condiciones no reducidas demostró a eso la mayor parte de la alfa del bus de interface de fines generales en el patient' las plaquetas de s no eran disulfuro ligado al bus de interface de fines generales beta. La DNA que ordenaba análisis demostró el heterocigoto compuesto para dos solas substituciones independientes del nucleótido: de Tyr (TAC) a Cys (TGC) en el residuo 88, y del ala (GCC) a favorable (CCC) en el residuo 108 en su gene beta del bus de interface de fines generales. Estas substituciones no fueron encontradas en muestras genomic de la DNA a partir de 108 individuos normales. Estas mutaciones pudieron dar lugar a la expresión disminuida del GPIb/IX complejo y pueden influenciar la asociación del complejo con el esqueleto de la membrana, por lo tanto deteriorando morfología normal de la plaqueta. Además, el fenotipo causado por mutaciones en las subunidades del complejo de GPIb/IX podía atravesar el espectro de un fenotipo normal, GPD aislado, a un verdadero desorden de la sangría, tal como síndrome de Bernard-Soulier. ( info) |
214/223. La deficiencia (33P) de los puntos de enlace 2MeS-ADP en las plaquetas con la secreción deserta, los almacenes normales del gránulo y producción normal del tromboxano a2. Evidencie que el ADP refuerza la secreción de la plaqueta independientemente de la formación de agregados de la plaqueta y de producción grandes del tromboxano a2. Por el " del término; Secreción primaria Defect" (PSD), significamos un grupo heterogéneo común de defectos congénitos de la secreción de la plaqueta, caracterizados por una onda primaria normal de la agregación de la plaqueta inducida por el ADP y otros agonistas, de una concentración normal de contenido del gránulo de la plaqueta, y de la producción normal del tromboxano a2. Las anormalidades bioquímicas responsables de PSD no son bien sabido. Puesto que un defecto de la secreción similar a PSD se encuentra en las plaquetas que son seriamente deficientes de los puntos de enlace para el ADP 2MeS-ADP análogo y no agregan en respuesta al ADP, probamos la hipótesis que las plaquetas de PSD han disminuido moderado los puntos de enlace 2MeS-ADP, que pueden ser suficientes para la agregación ADP-inducida normal pero no para reforzar la secreción de la plaqueta. El atascamiento específico [33P] de 2MeS-ADP a las plaquetas a partir de 3 sitios/plaqueta de los pacientes de PSD 490 (347, 443 y; KD 2.8-3.9 nanómetro) era más bajo que a las plaquetas a partir de 24 temas normales (647 [530-1102]; KD = 3.8 [2.3-7.3]) (punto medio [gama]). Los valores normales fueron encontrados en un cuarto paciente de PSD (710; KD 3.7). El grado de inhibición del aumento del campo de PGE1-induced por 0.1 ADP del microM era más bajo en pacientes que en controles. La secreción inducida por la endoperóxido U46619 análogo del normal, las plaquetas tratadas al ácido acetilsalicílicas bajo condiciones que previnieron la formación de agregados grandes fue reforzada por 1 ADP de mumol/l e inhibida por apyrase. Estos resultados indican que una deficiencia parcial de los receptores del ADP de la plaqueta pudo ser responsable del defecto de la secreción de la plaqueta en pacientes de alguÌn PSD y que el ADP refuerza la secreción de la plaqueta independientemente de la formación de agregados y de producción grandes del tromboxano a2. ( info) |
215/223. Transducción defectuosa de la señal a través del receptor del tromboxano a2 en un paciente con un desorden suave de la sangría: deficiencia de la formación del trifosfato del inositol 1.4.5 a pesar de la activación normal de la G-proteína. Describimos a una muchacha de 11 años con un desorden suave de la sangría desde niñez temprana. El desorden fue caracterizado por un rato que sangraba prolongado, y el patient' las plaquetas de s demostraron respuestas defectuosas de la agregación al tromboxano a2 (TXA2) U46619 mimético y ácido araquidónico. En cambio, las plaquetas demostraron respuestas normales a la trombina y al ionophore A23187 del Ca. Cuando el receptor de la plaqueta TXA2 fue examinado con [3H] - TXA2 el agonista etiquetado U46619, los constantes de la tarifa de la disociación del equilibrio (kd) y la concentración máxima de puntos de enlace (Bmax) del patient' las plaquetas de s estaban dentro de gamas normales. La actividad normal de GTPase también fue inducida en el patient' las plaquetas de s por el estímulo con U46619, sin embargo, formación del trifosfato del inositol 1.4.5 (IP3) no fueron inducidas por U46619. Estos resultados sugieren que el patient' las plaquetas de s tenían un defecto en la activación de la fosfolipasa C más allá de los receptores TXA2. ( info) |
216/223. Exposición de Aminophospholipid, microvesiculation y fosforilación anormal de la tirosina de la proteína en las plaquetas de un paciente con el síndrome de Scott: un estudio usando los agonistas fisiológicos y los anestésicos locales. El síndrome de Scott es un desorden hemorrágico heredado raro caracterizado por la inhabilidad de glóbulos de exponer aminophospholipids y de verter micropartículas. Hemos tenido la oportunidad de estudiar a un paciente francés recientemente divulgado con este síndrome y de haber confirmado por medio de un análisis de la fluorescencia para el movimiento del lípido del transbilayer una exposición reducida del aminophospholipid cuando las plaquetas fueron estimuladas con el ionomycin del calcio-ionophore, a pesar de una elevación normal de Ca2 intracelular. La activación de la secreción y del calpain también fue demostrada para ser normal. Perceptiblemente, el nivel de proteínas phosphotyrosine-etiquetadas en las plaquetas tratadas con trombina o una mezcla de la trombina del colágeno y particularmente la fosforilación de una venda de 40 kD fueron reducidos seriamente. Además, inhibición de enzimas tiol-que contienen. incluyendo las tirosina-fosfatasas, por maleimide del N-etilo no llevó a la exposición del aminophospholipid en el patient' plaquetas de s, a pesar de la fosforilación creciente de la proteína de la tirosina. En cambio, las drogas amphiphilic de la membrana tales como tetracaine y el propranolol indujeron la exposición del aminophospholipid de la superficie en las plaquetas de Scott y el vertimiento de micropartículas, de tal modo demostrando que la perturbación de la membrana puede llevar a la pérdida de asimetría del fosfolípido en este síndrome. Nuestros resultados proporcionan la primera penetración que la carencia de la expresión de fosfolípidos procoagulantes y de la formación de la micropartícula en plaquetas del síndrome de Scott se asocia a un defecto de la señalización intracelular. ( info) |
217/223. Tipo síndrome de IV Ehlers-Danlos con enfermedad de la piscina del delta-almacenaje de la plaqueta. Un caso del tipo síndrome de IV Ehlers-Danlos con una enfermedad parcial de la piscina del delta-almacenaje de la plaqueta se divulga. La diagnosis de Ehlers-Danlos era clínica. La deficiencia plaqueta-densa del gránulo fue determinada por morfología ultraestructural de la plaqueta. Los cuerpos densos fueron disminuidos en gran número, y la mayoría de la pérdida o de la fragmentación demostrada del material electrón-denso. Los estudios de la agregación revelaron una respuesta retardada al ristocetin y al ácido araquidónico, que fue corregido con el acetato-DDAVP del desmopressin. ( info) |