1/144. fibrinogen St. Gallen jag (gamma 292 Gly--> Val): bevis för strukturella förändringar som orsakar defekta polymerisation och fibrinogenolysis. fibrinogen St. Gallen jag upptäcktes i en asymtomatiska schweiziska kvinna. Rutinmässiga koagulering tester avslöjade en långvarig trombin och reptilase tid. Funktionellt uppmätta fibrinogen nivåer var betydligt lägre än dem som fastställts immunologiskt. Polymerisation av Akutfasprotein monomerer härrör från renad fibrinogen försenades i närvaro av kalcium eller edta. Normala fibrinopeptide a och b övergång genom trombin fastställdes. En onormal försämring av fibrinogen St. Gallen I av plasminbehandlade observerades. Fragment D1 av normala fibrinogen var helt skyddade mot ytterligare Proteolys i närvaro av 10 mM kalcium, medan fibrinogen St. Gallen jag var delvis ytterligare degraderas till fragment D2 och D3. I närvaro av 10 mM edta, konvertering av variant fragment D1 till D2 ännu snabbare medan utarmning av fragment D2 till D3 försenades i jämförelse med nedbrytning av fragment D1 och D2 av normala fibrinogen. Tre hög-tillhörighet kalcium bindande webbplatser har hittats i både normala och variant fibrinogen. Mutationen screening med SSCP analys föreslog en mutation i exon VIII av gamma-kedjan genen. Cyklisk sekvensering av denna gen del visade en enda bas ersättning från g t av de base 7527, leda till utbyte av gamma 292 glycin valin. Samma mutationen har redan beskrivits för fibrinogen variant baltimore I. molekylär modellering utfördes av en del av gamma-kedjan som innehåller webbplatsen mutation, baserat på nyligen offentliggjorda X-ray crystal structures humanfibrinogen fragment d och en 30 kD C-terminal del av gamma-kedjan. Betydande strukturella förändringar till följd av substitution av glycin genom valin vid gamma 292 observerades, t.ex. spridning av protein ryggraden, troligen leder till en modifierad tillgänglighet av plasmic klyvning sidor i gamma-kedjan vid 356 Lys och 302 Lys. En förskjutning av gamma 297 Asp som är involverade i interaktion mellan fragment d med den Gly-Pro-Arg-Pro-peptiden noterades av molekylär modellering. Den sistnämnda iakttagelsen är kompatibel med fördröjd polymerisation av Akutfasprotein monomerer. ( info) |
2/144. Bilaterala glasaktiga hemorrhages i ett spädbarn med låga fibrinogen nivåer. Konstaterandet av retinal eller glaskropp blödning i ett barn yngre än 3 år kan orsaka betydande kontroverser med etiologin, eftersom den väcker misstankar om nonaccidental skada. blod dyscrasias har dokumenterats för att orsaka retinal och glaskropp hemorrhages i barn och vuxna, men de har sällan rapporterats vara orsak till retinal hemorrhages i nyfödda. Vi rapportera om en patient med en låg plasma fibrinogen nivå som hade bilaterala retinal blödning som fortsatte att glaskropp blödning. Denna subtila avvikelse av blod clotting cascade orsakade betydande retinal och glaskropp blödning i ett barn utan riskfaktorer för missbruk. ( info) |
3/144. Återkommande spontana intracerebralt blödning i en fältet afibrinogenemic patienten: diagnostiska fallgropar och terapeutiska alternativ. BAKGRUND: Koagulering störningar kan orsaka intracerebralt blödningar som kan vara svåra att upptäcka eftersom efterföljande aberrant clot bildandet kan maskera tidig upptäckt. Detta är en viktig fallgrop eftersom när diagnostiseras tidigt, blödningar hos dessa patienter är behandlingsbara. MÅL beskrivning: En patient med medfödd afibrinogenemia presenteras med återkommande Hemipares. Spontana intracerebralt blödning diagnostiserades, trots en inledande negativa datortomografi. diagnos, terapi och komplikationer av terapi diskuteras. SLUTSATSER: Intracerebralt blödning måste vara starkt misstänkt i varje patient med en koagulering störning presenterar med matchande kliniska symtom. Terapi måste installeras omedelbart, innan ytterligare utredningar, och bör fortsätta även när första neuroimaging är negativt. ( info) |
4/144. Hypofibrinogenemia är associerad med en heterozygous missense mutation gamma153Cys till arg (Matsumoto IV): in vitro-uttryck visar defekta utsöndring av variant fibrinogen. Vi analyserade genetiskt ett fall av hypofibrinogenemia som visade ingen blödning eller thrombotic tendens. Direkt sekvensering av ett polymerase chain reaction-amplifierats gamma-kedjan gen segment visade romanen nukleotid ersättning. Denna heterozygous mutation kodar både Cys (TGT) och Arg (CGT) vid restsubstanser 153. Vi beredda att grunden för fibrinogen bristen undersöka, uttrycket vektorer som innehåller mutanta gamma-kedjan DNAs kodning gamma153R och gamma153A för in vitro-uttryck i kinesisk hamster äggstock (CHO) celler. Enzyme-linked immunosorbent assay och immunoblot analys av odlingssubstrat och cellen lysates visade att CHO celler transfected med gamma153R eller gamma153A syntetiserade variant gamma-kedjan, men inte secrete variant fibrinogen i odlingssubstratet. Metabolisk puls-chase experiment visade att fibrinogen församlingen var nedsatt när antingen variant gamma-kedjan uttrycktes. I celler som uttrycker normala fibrinogen sågs Sidodelarna-bly intermediärer och intakt fibrinogen i cellen lysates berett efter kort (3 minuter) eller långt (1 timme) inkubation med (35) S-metionin. Varken mellanprodukter eller intakt fibrinogen sågs med variant gamma-kedjor. Dessa uppgifter tyder på att gamma-kedjor har en viktig tidig roll i fibrinogen församling. Våra resultat stöder således modellen för fibrinogen församlingen föreslås av Huang et al (J Biol Chem 268:8919, 1993), där det första steget i församlingen är bildandet av alphagamma eller betagamma dimers, eller båda. Denna modell innebär att gammaCys153 har en avgörande roll i bildandet av dessa tidiga församlingen intermediärer. Vi drog slutsatsen att gamma153Cys--> Arg substitution tillåter inte fibrinogen församling och utsöndring, och detta är manifest in vivo som en fibrinogen brist. Vi utses fibrinogen Matsumoto IV denna variant. ( info) |
5/144. Missense mutationer i människors beta fibrinogen gene orsaka medfödda afibrinogenemia genom att försämra fibrinogen utsöndring. Medfödda afibrinogenemia är en sällsynta autosomal Recessiv sjukdom som kännetecknas av en blödning som varierar från mild till svår och med fullständig frånvaro eller extremt låga nivåer av plasma och Trombocyt fibrinogen. Även om flera mutationer i fibrinogen generna är associerade med dysfibrinogenemia och hypofibrinogenemia har beskrivits, är de genetiska defekterna av medfödda afibrinogenemia till stor del okända, utom för en nyligen rapporterade 11-kb borttagning av fibrinogen aAlfa-kedjan genen. Mutationen andra mekanismer än strykningen av en fibrinogen gene är dock som kan förekomma eftersom patienter med afibrinogenemia visar inga brutto ändringar inom fibrinogen klustret har rapporterats. Vi testat denna hypotes genom att studera de berörda medlemmarna i två familjer, en italienska och en iransk, som hade belägg för stora borttagningar i fibrinogen gener. Sekvensering av fibrinogen gener i 2 probands hittat 2 olika homozygous missense mutationer i exons 7 och 8 i Bbeta-kedjan gen, vilket leder till aminosyra substituering Leu353Arg och Gly400Asp, respektive. Transient transfektion experiment med plasmider uttrycker vilda och mutanta fibrinogens visat att förekomsten av antingen mutationen var tillräcklig för att avskaffa fibrinogen utsöndring. Dessa resultat har visat att missense mutationer i Bbeta fibrinogen gene skulle kunna orsaka medfödda afibrinogenemia genom att försämra fibrinogen utsöndring. (blod. 2000; 95:1336-1341). ( info) |
6/144. Hypofibrinogenemia i en enskild med 2 kodning (gamma82 A--> G) och Bbeta235 P--> L och 2 icke mutationer. Vi undersökte den molekylära basen för hypofibrinogenemia i en man med en normal trombin koagulering tid. Protein analys anges lika plasma uttryck för 2 olika Bbeta alleler och dna sequencing bekräftade heterozygosity för en ny Bbeta235 P--> L mutation. Protein analysen visade också en kedja av romanen gamma(D) närvarande vid ett förhållande på 1: 2 förhållande till gamma(A)-kedjan. masspektrometri anges en minskning av 14 d gamma (D)-kedjan massa och dna-sekvensering visade detta orsakades av en roman gamma82 A--> G substitution. dna-sekvensering etablerade heterozygosity för 2 ytterligare mutationer: T--> C i intron 4 i aAlfa gen samt A--> C i den icke-kodande regionen i 3'-änden av Bbeta gen. Studier om mannens dotter, tillsammans med plasma uttryck nivåer, diskonterade både aAlfa och Bbeta mutationer som orsak till den låga fibrinogen, vilket tyder på att gamma82 mutationen orsakade av hypofibrinogenemia. Detta stöddes av analys av 31 normala kontroller som Bbeta mutationer påträffades på polymorf nivåer, med en allelic frekvens på 5% för Bbeta235 mutationen och 42% för Bbeta 3' untranslated mutationen. Gamma82 mutationen var dock unikt för propositus. Rester gamma82 ligger i den triple helix som avgränsar de e och d domänerna och avvikande förpackas helices kan förklara den minska fibrinogen koncentrationen. (blod. 2000; 95:1709-1713). ( info) |
7/144. Prenatal och peripartum hantering av medfödd afibrinogenaemia. Vi upplevde tre fall och fyra framgångsrika leveranser med medfödd afibrinogenaemia och föreslå följande riktlinjer för prenatala och peripartum förvaltning: (i) könsstympning avblodning vanligtvis börjar vid 5 veckors graviditet och spontanabort alltid inträffar vid 6-8 veckors graviditet utan fibrinogen infusion; (ii) fibrinogen måste ligga minst 0,60 g/l och, om möjligt, högre än 1,0 g/l under graviditeten, (iii) de nödvändiga belopp av fibrinogen öka under graviditet gång och prematur arbete sker. (iv) fibrinogen nivå under kontinuerlig infusion av fibrinogen under arbetskraft måste vara minst 1,5 g/l och, om möjligt, högre än 2,0 g/l att förhindra högre abruption, v barnsängsperiod är vanligtvis primärdomänkontrollant med en lägre dos av fibrinogen infusion. ( info) |
8/144. fibrinogen brescia: lever endoplasmatiska nätmagen lagring och hypofibrinogenemia på grund av en gamma284 Gly--> Arg mutation. Proposita drabbades av lever cirros och biopsi visade typ 1 membran-bundna glasfiber införanden. De lever integration organ var svagt Periodisk syra-Schiff diastasen-positiva, och på immunoperoxidase färgning reagerade särskilt med anti-fibrinogen antiserum. Koagulering utredningar visade låga funktionella och antigena fibrinogen tillsammans med en långvarig trombin tid på 37 sekunder (normal, 17-22 sekunder) suggestiva av en hypodysfibrinogenemia. dna-sekvensering av alla tre fibrinogen gener, som visade en enda heterozygous mutation i GGG (Gly)--> CGG (Arg) vid kodon 284 av gamma-kedjan genen. Dock undersökning av renad fibrinogen kedjor av natrium dodecyl sulfat-urea gel electrophoresis, reverse-fas högpresterande vätskekromatografi, jonbyte high-performance vätskekromatografi och isoelektrisk fokusering, inte kunnat visa några bevis på att den mutanta gamma(Br) kedjan i plasma fibrinogen. Denna slutsats styrktes av electrospray jonisering masspektrometri, som visade endast en normal gamma (och Bbeta) kedja massa, men en stor ökning av del av deras disialo isoforms. Vi spekulerar i att Skellefteåsjukan variant proteinets lever lagring och den efterföljande hypofibrinogenemia, och att den funktionella defekten (dysfibrinogenemia) resultat från hypersialylation av annars normala Bbeta och gamma kedjor som följd att de lever cirrhos. Dessa slutsatser stöddes av studier på sex andra familjemedlemmar med hypofibrinogenemia och i huvudsak normala clotting gånger, som var heterozygous för gamma284 Gly--> Arg mutation. ( info) |
9/144. Homozygous trunkering av fibrinogen a alfa kedjan inom ihoprullat spole orsakar medfödd afibrinogenemia. Den molekylära basen för en roman medfödda afibrinogenemia har fastställts. Proposita, den enda berörda medlemmen i en consanguineous norsk familj, lider av en måttlig till allvarliga blödande störningar på grund av att den totala avsaknaden av några påvisbara fibrinogen. Dot blotting av solubilized trombocyter visade en liten mängd gamma kedjan men ingen a alpha eller b beta kedjor, medan inga kedjor upptäcktes i plasma dot blotting. dna-sekvensering av a alfa kedjan genen visade en homozygous C--> T transversion 557 nukleotider från transkription inledande webbplats. Förändringen nukleotid förutspår nonsense mutation a alpha 149 Arg (CGA)--> stop (TGA). Tidiga trunkering av a alfa kedjan visas leda defekta församlingen eller utsöndring av fibrinogen, förmodligen på grund av att avlägsnandet av C-terminal disulfid ring rester som kritiskt krävs för bildandet av en stabil 3-kedjad hälften molekyl. (blod. 2000; 96:773-775). ( info) |
10/144. Ett fall av medfödda afibrinogenemia: fibrinogen Hakata, romanen nonsense mutation av fibrinogen gamma-kedjan genen. Medfödda afibrinogenemia på grund av att en roman homozygous nonsense mutation av fibrinogen gamma-kedjan gen, fibrinogen Hakata, hittades i en 18-årig japansk flicka som hade fått extra fibrinogen terapi eftersom hon var 4 månader gammal. plasma fibrinogen koncentrationer av de proband mättes som mindre än 10 mg/dl med en funktionell metod och mindre än 17 mg/dl med en immunologiska metod. fibrinogen koncentrationer av hennes familj var i intervallet för 94-164 mg/dl. Den proband och hennes familj hade inga andra kliniska symtom. Arvsmassans dna av den proband och hennes familj var isolerat från leukocyter och alla exons fibrinogen underenheter och deras intron/exon gränser skulle analyseras. En genetisk mutation, en guanin-till-tymin (G-till-T) transversion vid nukleotid position 5860, identifierades på exon 7 i gamma-kedjan genen. Denna mutation ändrats kodon för väljs återstoden av gamma-kedjan från GAG (Glu) till TAGG (stop). Inga andra mutation observerades. AAlfa, Bbeta och gamma kedjor observerades i plasma heterozygous familjemedlemmar. Dock upptäcktes bara ett spår mängd aAlfa kedjan och ingen gamma kedjan i plasma av den proband. ( info) |