11/144. afibrinogenemia: prima identificazione di una mutazione d'impionbatura nel gene della catena di gamma del fibrinogeno che conduce ad un troncamento importante della catena di gamma. Il afibrinogenemia congenito è un disordine recessivo autosomal raro caratterizzato dall'assenza completa di fibrinogeno del plasma e da una tendenza di spurgo che varia da delicato a moderatamente severo. Al lato di un'omissione di gene quasi intero della Aalpha-catena, soltanto 2 mutazioni di senso sbagliato nel dominio del C-terminale della Bbeta-catena molto recentemente sono state descritte come essendo associando con il afibrinogenemia. Abbiamo studiato un paziente pakistano con i livelli illimitati del plasma di fibrinogeno funzionale e immunoreactive. L'ordinamento dei geni del fibrinogeno ha rivelato un G omozigotico--> Una transizione alla posizione 5 dell'introne 1 del gene della gamma-catena. La gamma-catena preveduta del fibrinogeno del mutante conterrebbe il peptide di segnale, seguito da una breve stirata degli amminoacidi aberranti, precedente un codone prematuro di arresto. Per dimostrare il ruolo causale della mutazione identificata, abbiamo preparato i vettori di espressione che contengono una regione del gene della gamma-catena del fibrinogeno che misura gli essoni 1 - l'introne 4 e trasportare un G o A alla posizione 5 della transfezione transitoria dell'introne 1. del plasmide mutato in cellule hela, seguita dall'estrazione del rna e dall'analisi d'inversione di reazione a catena della transcriptase-polimerasi (RT-PCR), ha permesso che noi dimostrassimo la produzione di un rna di messaggero erroneamente impiombato (mRNA), mantenente l'introne 1, come indicato dall'ordinamento diretto. Un'impionbatura di normale si è presentata in cellule hela transfected con il selvaggio-tipo plasmide. Ciò è il primo rapporto di una mutazione nel gene della gamma-catena del fibrinogeno che causa il afibrinogenemia ed indica che, oltre che i geni della Bbeta-catena e di Aalpha, il gene della gamma-catena deve anche essere considerato nella selezione di mutazione per il afibrinogenemia. ( info) |
12/144. A G--U'alla mutazione in IVS-3 del gene umano del fibrinogeno di gamma che causa afibrinogenemia dovuto l'impionbatura anormale del rna. Il afibrinogenemia congenito è un disordine recessivo autosomal raro caratterizzato da una diatesi emorragica della severità variabile. Anche se più di 100 famiglie con questo disordine sono state descritte, i difetti genetici sono stati caratterizzati in pochi casi. Un'indagine su una giovane persona, prole di un'unione consanguinea, con i livelli inosservabili di fibrinogeno funzionale e quantitativo, è stata condotta. L'analisi di sequenza dei geni del fibrinogeno ha mostrato un omozigotico G--U'alla mutazione al quinto nucleotide (NT 2395) della terza sequenza di intervento (IVS) del gene della gamma-catena. I suoi parenti di primo grado, che hanno avuti approssimativamente la metà di normale di indici del fibrinogeno e concordanza indicata fra i livelli funzionali ed immunologici, erano heterozygtes. G--U'a cambiamento predice la scomparsa di un luogo erogatore della giuntura. Dopo che la transfezione con una costruzione, contenendo il selvaggio-tipo o la sequenza mutata, cellule con la costruzione del mutante ha mostrato un rna di messaggero aberrante (mRNA), costante con il salto dell'essone 3, ma non il mRNA previsto. L'ordinamento del mRNA anormale ha mostrato che l'assenza completa di salto dell'essone 3. dell'essone 3 predice l'omissione della sequenza di amminoacido da residuo 16 a residui 75 e lo spostamento di telaio di lettura all'amminoacido 76 con un codone prematuro di arresto all'interno dell'essone 4 alla posizione 77. Quindi, il prodotto tronco del gene della gamma-catena non interagirebbe con altre catene per formare la molecola matura del fibrinogeno. I risultati correnti indicano che le mutazioni all'interno delle regioni altamente conservate di IVS di geni del fibrinogeno potrebbero interessare l'efficienza dell'impionbatura normale, provocante il afibrinogenemia congenito. ( info) |
13/144. Hypofibrinogenaemia con eterozigosi composta per due mutazioni chain di gamma - Ala di gamma 82--> Gly e un introne due GT--> Alla mutazione del luogo della giuntura. Abbiamo studiato la base molecolare del hypofibrinogenaemia in una donna con una storia di spurgo ricorrente e gravidanza-collegato e dell'aborto. Ha avuta un fibrinogeno di Clauss di 0.9 mg/ml e la PAGINA di SDS di fibrinogeno purificato ha mostrato un modello normale delle catene. Il controllo per quanto attento dei profili d'inversione di separazione della catena di fase ha mostrato l'omozigosi apparente per una forma più idrofila della catena di gamma. L'ordinamento del dna ha mostrato soltanto l'eterozigosi per un CGT--> GGT (Ala--> La mutazione di Gly) a codone gamma82, ma ulteriore ordinamento ha mostrato una mutazione supplementare di sequenza della giuntura della GT al 5' estremità dell'introne 2 del gene di gamma. La traduzione di mRNA che contiene questo introne provocherebbe il troncamento prematuro che spiega l'omozigosi fenotipica del Ala gamma82--> Sostituzione di Gly. Il patient' la sorella di s ha avuta un disordine delicato di spurgo con il hypofibrinogenaemia ed anche era un heterozygote composto per le mutazioni di y. Il suo nipote ha avuto soltanto la mutazione novella del luogo della giuntura, mentre la sue madre e figlia hanno ereditato soltanto il Ala gamma82--> Sostituzione di Gly. ( info) |
14/144. Spurgo intracranico spontaneo in due pazienti con il afibrinogenaemia congenito ed il ruolo della terapia del rimontaggio. Il afibrinogenaemia e il hypofibrinogenaemia congeniti sono disordini rari della emostasia. In questo caso segnali che i problemi hanno proposto nell'amministrazione di due pazienti con i livelli del fibrinogeno di meno che 0.1g L (- 1) e chi ha sviluppato lo spurgo intracranico è considerato. Il valore del concentrato del fibrinogeno e del ruolo della profilassi inoltre è discusso. ( info) |
15/144. La formazione della fibrina ed il cross-linking aberranti di fibrinogeno Nieuwegein, una variante con una Aalpha-catena ridotta, altera la formazione endothelial del tubo capillare. Un dysfibrinogenemia congenito, il fibrinogeno (Nieuwegein), è stato scoperto in un giovane senza alcune complicazioni o spurgo thromboembolic. Un'inserzione omozigotica di singolo nucleotide (C) nel codone Aalpha 453 (pro) ha introdotto un codone di arresto alla posizione 454, che ha provocato l'omissione del segmento Aalpha 454-610 del carbossilico-terminale. La cisteina spaiata seguente a Aalpha 442 ha generato i complessi dell'fibrinogeno-albumina dei pesi molecolari differenti. Le anomalie molecolari di fibrinogeno (Nieuwegein) hanno condotto ad una coagulazione in ritardo e ad una rete della fibrina con una torbidezza bassa. La microscopia elettronica ha confermato che i pacchi sottili della fibrina sono stati organizzati in una rete fine. L'uso di fibrinogeno (Nieuwegein) - fibrina derivata (fibrina (Nieuwegein)) nell'angiogenesi in vitro un modello ha provocato una forte riduzione di formazione del tubo. Il ingrowth delle cellule endothelial microvascolari umane (hMVEC) era indipendente da alfa (v) beta (3), indicando che il ingrowth riduttore non è dovuto l'assenza del luogo di RGD-adesione alla posizione Aalpha 572-574. Piuttosto, la struttura alterata di fibrina (Nieuwegein) è la causa, poiché la normalizzazione parziale della rete della fibrina abbassando il pH durante la polimerizzazione ha provocato una formazione aumentata del tubo. Considerando che il fattore XIIIa ulteriore ha fatto diminuire il ingrowth di hMVEC in fibrina (Nieuwegein), il transglutaminase del tessuto (TG), che è liberato nelle zone della ferita del vaso, non ha fatto. Ciò è in conformità con l'assenza del luogo di cross-linking per il TG nelle alfa-catene di fibrinogeno (Nieuwegein). In conclusione, questo dysfibrinogenemia congenito recentemente scoperto ha un tempo di coagulazione in ritardo e conduce alla formazione di struttura alterata della fibrina, che non potrebbe essere unita con legami atomici incrociati dal TG e che è meno di appoggio per ingrowth delle cellule endothelial. ( info) |
16/144. Hypofibrinogenemia dovuto il romanzo 316 asp --> Sostituzione di Tyr nella catena di Bbeta del fibrinogeno. Abbiamo studiato la base molecolare del hypofibrinogenemia in una donna con un fibrinogeno del plasma di 1.0 mg/ml. Dopo l'ordinamento la regione di codificazione e dei contorni intronic di tutti e tre i geni del fibrinogeno un singolo GAC eterozigotico--> La mutazione di TAC è stata identificata a codone 316 del gene di Bbeta. Questo asp--> Sostituzione di Tyr segregata con il hypofibrinogenemia nell'unico l'altro membro di famiglia commovente. Esame da SDS-PAGE, focalizzazione isoelettrica, cromatografia d'inversione di fase e spectrometery totale electrospray di ionizzazione (ESI), non riusciti per rilevare espressione di nuova catena di Bbeta in fibrinogeno purificato del plasma. L'assenza della catena variabile è stata confermata dal tracciato trittico di ESI; mentre [m. 1 H] e [m. 2 H] gli ioni del peptide commovente (MGPTELLIEMEDWK) erano chiaramente visibili a 1.692 e 847 m/z, non ci erano nuovi segnali (1.741 o 871 m/z) a che indicherebbe l'espressione della variante in plasma. L'asp 316 ed il relativo omologo della catena di gamma (asp 252) sono conservati in tutta la specie conosciuta ed in questa è il primo rapporto di una mutazione a l'uno o l'altro di questi. Il residuo sembra essere critico nel mantenimento della struttura dello strato incagliato cinque che forma la caratteristica strutturale dominante dei dominii di D. ( info) |
17/144. Lesioni ischemiche di Embolized delle punte in un paziente afibrinogenemic: attinenza possibile con trombina di circolazione in vivo. Il fibrinogeno svolge un ruolo complesso in hemostasis, nella trombosi e nella malattia vascolare. Hyperfibrinogenemia è un fattore di rischio vascolare indipendente e il dysfibrinogenemia può provocare la trombosi. Il afibrinogenemia è solitamente responsabile della diatesi emorragica e le lesioni ischemiche inattese sono intriganti. Segnaliamo il caso di un paziente afibrinogenemic, che all'età di 30 ha sviluppato le lesioni ischemiche dei piedi relativi a stenosi severa delle arterie iliache e hypogastric. La biopsia della lesione dell'arteria iliaca ha mostrato un'iperplasia myointimal intensa. Abbiamo effettuato l'analisi emostatica standard ed abbiamo analizzato gli indicatori di attivazione delle piastrine ed i fattori di coagulazione e la cinetica della generazione della trombina nel paziente e nei plasmi normali di controllo hanno trattato o non con il reptilase. Le lesioni arteriose occlusive sono state attribuite ad un ematoma disgregativo che penetra il lumen vascolare. Concentrazione nella trombina dopo che aumento dell'aggiunta del calcio contrassegnato nel paziente afibrinogenemic ed in plasma normale defibrinated, rispetto a plasma normale non trattato. i complessi dell'Trombina-antitrombina (T-AT) contrassegnato sono stati aumentati mentre i frammenti della protrombina F1 2 hanno rimanere nella gamma normale. Questi risultati hanno indicato l'attivazione di coagulazione e di trombina di circolazione in vivo. La trombina attiva le piastrine che secernono i fattori di sviluppo per le cellule di muscolo liscio e generano l'iperplasia intimal. L'emorragia ricorrente all'interno della parete del vaso ha potuto indurre la ferita e la generazione locale della trombina. La trombina non bloccata dal grumo è disponibile per l'attivazione della piastrina e l'espansione e la proliferazione delle cellule di muscolo liscio. L'assenza di protezione protettiva della fibrina sul intima ha potuto rappresentare la vulnerabilità e il embolization del intima. Il afibrinogenemia compare in questa situazione paradossale come fattore di rischio vascolare. ( info) |
18/144. Enti di inclusione citoplasmici ed epatite minima: immagazzinaggio del fibrinogeno senza hypofibrinogenemia. Un ragazzo giapponese di 12 anni ha avuto l'altezza e fluttuazione croniche dei livelli della transaminasi del siero da infanzia, senza i segni o i sintomi di guasto di fegato. Le infezioni usuali o i disordini metabolici si sono eliminati da considerazione. Nessun coagulopathy o anomalia nelle concentrazioni nel plasma dei fattori di coagulazione è stata trovata. La microscopia chiara degli esemplari di biopsia del fegato ottenuti alle età 2, 5 e 7 anni ha mostrato il leggero scompiglio del hepatocyte e il mononucleare-leucocita minimo infiammazione lobular, con gli enti di inclusione eosinofili nel citoplasma dei hepatocytes durante il lobulo. Questi corpi hanno macchiato con la tecnica periodica dello acido-Schiff (PASSO DI DANZA); il materiale Passo di danza-positivo era parzialmente diastasi digeribile e sul immunostaining ha contrassegnato per fibrinogeno ma non per l'alfa-1-antitripsina. Su microscopia elettronica di trasmissione, i corpi sono stati rappresentati da materiale con precisione granulare contenuto all'interno delle membrane e sono stati interpretati come a titolo di prova reticolo endoplasmico. L'immagazzinaggio del fibrinogeno può essere manifesto come epatite minima senza coagulopathy. ( info) |
19/144. Antifibrinogen IgG, fibrinogeno e complessi di Clq che circolano in un proband hypodysfibrinogenemic. Isolamento, stechiometria e descrizione parziale. Gli anticorpi di circolazione di antifibrinogen sono stati segnalati in persone afibrinogenemic rare, accadenti apparentemente dopo la terapia del rimontaggio del fibrinogeno, ma i complessi immuni non sono stati descritti. In questo rapporto descriviamo fare circolare i complessi immuni costituiti da un antifibrinogen monoclonale IgG in un hypodysfibrinogenemic eterozigotico (alfa 16 Arg di A--> Proband di Cys). Valutato dalla sequenza parziale della proteina e da altre analisi, ogni complesso immune ha consistito di una fibrina (ogen), di un C1q e di 3-4 molecole di IgG. I complessi erano cryoprecipitable, una proprietà anche visualizzata dalle miscele di proband IgG e fibrinogeno normale. Indicando che sia i dominii di E che di D erano necessari per questo comportamento, il cryoprecipitability si è abolito tramite preincubazione del IgG isolato con o il frammento normale isolato D100 del fibrinogeno o il E. costante con la reattività crociata del IgG con il normale ed il fibrinogeno del mutante, i risultati suggerisce che l'epitopo primario risieda su un luogo del D-E sul polimero della fibrina costituito dalle molecole normali ed anormali che contengono (o mutante) il peptide uncleaved A. ( info) |
20/144. Una mutazione di alterazione dello schema di lettura nel gene umano della Aalpha-catena del fibrinogeno (arresto di alterazione dello schema di lettura del Ala di Aalpha (499)) che conduce al dysfibrinogen San Giovanni Rotondo. Abbiamo studiato un uomo bianco asintomatico da 53 anni con i livelli del plasma insieme a trombina prolungata ed i tempi funzionali, ma non immunologici, fibrinogeno in diminuzione di reptilase, rilevati con gli studi di coagulazione sistematici prima di una procedura chirurgica. Una nuova singola omissione eterozigotica del nucleotide (C) alla posizione Ala499 all'interno del gene della Aalpha-catena è stato identificato, che ha predetto i cambiamenti degli amminoacidi corrispondenti messi dalla parte successiva dell'essone V e dall'apparenza di un codone prematuro di arresto alla posizione 518 (arresto di alterazione dello schema di lettura del Ala di Aalpha [499]). Il nuovo fibrinogeno disfunzionale, variante del San Giovanni Rotondo, è stato confermato in vivo dall'analisi di SDS-PAGE delle catene HPLC-purificate del fibrinogeno. L'esame di spettro totale del picco HPLC-purificato anormale ha dato (56.088 Da) un simile totale valutato a quello preveduto dall'analisi del dna del gene mutato della Aalpha-catena (56.088 Da) e, dopo digestione trittica, la Aalpha-catena tronca è stata indicata soltanto nella persona, che inoltre ha trasportato la Aalpha-catena normale. In più, l'analisi dello spettro totale della raccolta trittica della catena anormale ha confermato la presenza di nuova e cisteina spaiata all'ultima posizione che è stata preveduta per formare un ponticello di bisolfuro con l'albumina di siero umana. Immuno-macchi l'analisi ha confermato quella variante del San Giovanni Rotondo del fibrinogeno, ma il fibrinogeno non normale. importi notevoli contenuti di albumina. I risultati attuali confermano che la Aalpha-catena tronca che difetta della parte del dominio terminale può essere incorporata nelle molecole mature del fibrinogeno ed essere secernuta normalmente nella circolazione sanguigna. ( info) |