11/144. Afibrinogenemia : première identification d'une mutation de épissure dans le gène à chaînes gamma de fibrinogène menant à une troncation à chaînes gamma importante. L'afibrinogenemia congénital est un désordre récessif autosomal rare caractérisé par l'absence complète du fibrinogène de plasma et par une tendance de saignement s'étendant de doux modérément à grave. Près d'une suppression du gène presque entier d'Aalpha-chaîne, seulement 2 mutations faux-sens dans le domaine de C-borne de la Bbeta-chaîne ont été très récemment décrites comme étant associé à l'afibrinogenemia. Nous avons étudié un patient pakistanais présentant les niveaux immensurables de plasma du fibrinogène fonctionnel et immunoreactive. L'ordonnancement des gènes de fibrinogène a indiqué un G homozygote--> ; Une transition à la position 5 de l'intron 1 du gène de gamma-chaîne. La gamma-chaîne prévue de fibrinogène de mutant contiendrait le peptide signal, suivi d'un bout droit court des acides aminés anormaux, précédant un codon non-sens prématuré. Pour démontrer le rôle causal de la mutation identifiée, nous avons disposé des vecteurs d'expression contenant une région du gène de gamma-chaîne de fibrinogène enjambant de l'exon 1 à intron 4 et le transport d'un G ou d'un A à la position 5 de la transfection passagère de l'intron 1. du plasmide muté en cellules hela, suivie de l'extraction de RNA et de l'analyse renversée de la réaction en chaîne de transcriptase-polymérase (RT-PCR), nous a permis de démontrer la production d'un arn de messager incorrectement épissé (adn messagère), maintenant l'intron 1, comme montré par l'ordonnancement direct. Une épissure de normale s'est produite en cellules hela transfected avec le sauvage-type plasmide. C'est le premier rapport d'une mutation dans le gène de gamma-chaîne de fibrinogène causant l'afibrinogenemia et indique que, en plus des gènes d'Aalpha et de Bbeta-chaîne, le gène de gamma-chaîne doit également être considéré dans le criblage de mutation pour l'afibrinogenemia. ( info) |
12/144. A G--Un à la mutation dans IVS-3 du gène gamma humain de fibrinogène causant l'afibrinogenemia dû à l'épissure anormale d'arn. L'afibrinogenemia congénital est un désordre récessif autosomal rare caractérisé par une diathèse hémorragique de sévérité variable. Bien que plus de 100 familles avec ce désordre aient été décrites, des défauts génétiques ont été caractérisés dans peu de cas. Une enquête sur un jeune propositus, progéniture d'un mariage consanguin, avec les niveaux indétectables du fibrinogène fonctionnel et quantitatif, a été effectuée. L'analyse d'ordre des gènes de fibrinogène a montré un homozygote G--Un à la mutation au cinquième nucléotide (NT 2395) du troisième intron (IVS) du gène de gamma-chaîne. Ses parents first-degree, qui ont eu approximativement la moitié de normale des teneurs en fibrinogène et la concordance montrée entre les niveaux fonctionnels et immunologiques, étaient des heterozygtes. G--Un au changement prévoit la disparition d'un emplacement de distributeur d'épissure. Après que la transfection avec une construction, contenant le sauvage-type ou l'ordre muté, des cellules avec la construction de mutant ait montré un arn de messager anormal (adn messagère), compatible à sauter de l'exon 3, mais pas à l'adn messagère prévue. L'ordonnancement de l'adn messagère anormale a montré que l'absence complète de sauter de l'exon 3. de l'exon 3 prévoit la suppression de l'ordre d'acide aminé du résidu 16 jusqu'au résidu 75 et décalage de l'armature de lecture à l'acide aminé 76 avec un codon non-sens prématuré dans l'exon 4 à la position 77. Ainsi, le produit tronqué de gène de gamma-chaîne n'agirait pas l'un sur l'autre avec d'autres chaînes pour former la molécule mûre de fibrinogène. Les résultats courants prouvent que les mutations dans des régions fortement conservées d'IVS des gènes de fibrinogène pourraient affecter l'efficacité de l'épissure normale, provoquant l'afibrinogenemia congénital. ( info) |
13/144. Hypofibrinogenaemia avec l'hétérozygotie composée pour deux mutations à chaînes gamma - aile du nez du gamma 82--> ; Gly et un intron deux GT--> ; À la mutation d'emplacement d'épissure. Nous avons étudié la base moléculaire du hypofibrinogenaemia dans une femme avec une histoire du saignement récurrent et grossesse-associé, et de la perte. Elle a eu un fibrinogène de Clauss de 0.9 mg/ml et la PAGE de SDS du fibrinogène purifié a montré un modèle normal des chaînes. L'inspection de quelque manière que soigneuse des profils renversés de séparation de chaîne de phase a montré l'homozygotie apparente pour une forme plus hydrophile de la chaîne gamma. L'ordonnancement d'adn a montré seulement l'hétérozygotie pour une CGT--> ; GGT (aile du nez--> ; La mutation de Gly) au codon gamma82, mais davantage d'ordonnancement a montré une mutation additionnelle d'ordre d'épissure du GT au 5' ; extrémité de l'intron 2 du gène gamma. La traduction de l'adn messagère contenant cet intron aurait comme conséquence la troncation prématurée expliquant l'homozygotie phénotypique de l'aile du nez gamma82--> ; Substitution de Gly. Le patient' ; la soeur de s a eu un désordre doux de saignement avec le hypofibrinogenaemia et elle était aussi un heterozygote composé pour les mutations de y. Son neveu a eu seulement la mutation originale d'emplacement d'épissure, alors que sa mère et fille héritaient seulement de l'aile du nez gamma82--> ; Substitution de Gly. ( info) |
14/144. Saignement intra-crânien spontané dans deux patients présentant l'afibrinogenaemia congénital et le rôle de la thérapie de remplacement. L'afibrinogenaemia et le hypofibrinogenaemia congénitaux sont des désordres rares d'hémostasie. Rapportez dans ce cas-ci que les problèmes ont posé dans la gestion de deux patients présentant des niveaux de fibrinogène moins que 0.1g L (- 1) et qui a développé le saignement intra-crânien est considéré. La valeur du concentré de fibrinogène et du rôle de la prophylaxie est également discutée. ( info) |
15/144. La formation de fibrine et l'édition absolue anormales du fibrinogène Nieuwegein, une variante avec une Aalpha-chaîne raccourcie, change la formation endothéliale de tube capillaire. Un dysfibrinogenemia congénital, fibrinogène (Nieuwegein), a été découvert chez un jeune homme sans n'importe quelles complications ou saignement thromboembolic. Une insertion homozygote d'un nucléotide simple (c) dans le codon Aalpha 453 (pro) a présenté un codon non-sens à la position 454, qui a eu comme conséquence la suppression du segment Aalpha 454-610 de carboxylique-borne. La cystéine non appariée suivante chez Aalpha 442 a produit des complexes de fibrinogène-albumine de différents poids moléculaires. Les anomalies moléculaires du fibrinogène (Nieuwegein) ont mené à une coagulation retardée et à un réseau de fibrine avec une basse turbidité. La microscopie électronique a confirmé que des paquets minces de fibrine ont été organisés dans un réseau fin. L'utilisation du fibrinogène (Nieuwegein) - fibrine dérivée (fibrine (Nieuwegein)) dans l'angiogenèse in vitro un modèle a eu comme conséquence une réduction forte de formation de tube. L'ingrowth des cellules endothéliales microvasculaires humaines (hMVEC) était indépendant d'alpha (v) bêta (3), indiquant que l'ingrowth réduit n'est pas dû à l'absence de l'emplacement de RGD-adhérence à la position Aalpha 572-574. En revanche, la structure changée de la fibrine (Nieuwegein) est la cause, puisque la normalisation partielle du réseau de fibrine en abaissant le pH pendant la polymérisation a eu comme conséquence une formation accrue de tube. Considérant que le facteur xiiia autre a diminué l'ingrowth du hMVEC en fibrine (Nieuwegein), le transglutaminase de tissu (TG), qui est libéré dans les secteurs des dommages de navire, n'a pas fait. C'est en conformité avec l'absence de l'emplacement d'édition absolue pour le TG dans les alpha-chaînes du fibrinogène (Nieuwegein). En conclusion, ce dysfibrinogenemia congénital nouvellement découvert a un temps de coagulation retardé et mène à la formation d'une structure changée de fibrine, qui ne pourrait pas être réticulée par TG et qui est moins de support pour l'ingrowth des cellules endothéliales. ( info) |
16/144. Hypofibrinogenemia dû au roman 316 asp --> ; Substitution de Tyr dans la chaîne de Bbeta de fibrinogène. Nous avons étudié la base moléculaire du hypofibrinogenemia dans un femme avec du fibrinogène de plasma de 1.0 mg/ml. Après ordonnancement de la région de codage et des frontières intronic de chacun des trois gènes de fibrinogène un GAC hétérozygote simple--> ; La mutation de TAC a été identifiée au codon 316 du gène de Bbeta. Cet asp--> ; Substitution de Tyr isolée avec le hypofibrinogenemia dans le seul l'autre membre de la famille affecté. Examen par SDS-PAGE, focalisation isoélectrique, chromatographie renversée de phase et spectrometery de masse electrospray de l'ionisation (ESI), pour détecter l'expression de la nouvelle chaîne de Bbeta en fibrinogène purifié de plasma. L'absence de la chaîne variable a été confirmée par la cartographie tryptique d'ESI ; tandis que [M 1 H] et [M 2 H] les ions du peptide affecté (MGPTELLIEMEDWK) étaient clairement évidents à 1.692 et 847 m/z, il n'y avait aucun nouveau signal (1.741 ou 871 m/z) au lequel indiquerait l'expression de la variante dans le plasma. Asp 316 et son homologue à chaînes gamma (asp 252) sont conservés dans toutes les espèces connues et ceci est le premier rapport d'une mutation à l'une ou l'autre de ces derniers. Le résidu semble être critique en maintenant la structure de la feuille échouée par cinq qui forme le dispositif structural dominant des domaines de D. ( info) |
17/144. Lésions ischémiques d'Embolized des orteils dans un patient afibrinogenemic : pertinence possible avec la thrombine de circulation in vivo. Le fibrinogène joue un rôle complexe dans le hemostasis, la thrombose, et la maladie vasculaire. Hyperfibrinogenemia est un facteur de risque vasculaire indépendant et le dysfibrinogenemia peut provoquer la thrombose. L'Afibrinogenemia est habituellement responsable de la diathèse hémorragique, et les lésions ischémiques inattendues sont intrigantes. Nous rapportons le cas d'un patient afibrinogenemic, qui à l'âge de 30 a développé les lésions ischémiques des pieds liés à la sténose grave des artères iliaques et hypogastriques. La biopsie de la lésion d'artère iliaque a montré un hyperplasia myointimal intense. Nous avons exécuté l'analyse hémostatique standard et avons analysé les marqueurs d'activation des plaquettes et les facteurs de coagulation et la cinétique de la génération de thrombine dans le patient et dans les plasmas normaux de commande ont traité ou pas avec le reptilase. Des lésions artérielles occlusives ont été attribuées à un hématome disruptif pénétrant le lumen vasculaire. Concentration en thrombine après qu'augmentation d'addition de calcium nettement du patient afibrinogenemic et de plasma normal defibrinated, par rapport au plasma normal non traité. les complexes de Thrombine-antithrombine (T-AT) ont été nettement augmentés tandis que les fragments de la prothrombine F1 2 restaient dans la gamme normale. Ces résultats ont suggéré l'activation de la coagulation et de la thrombine de circulation in vivo. La thrombine active les plaquettes qui sécrètent des facteurs de croissance pour des cellules de muscle lisse et produisent du hyperplasia intimal. L'hémorragie récurrente dans le mur de navire pourrait induire les dommages et la génération locale de thrombine. La thrombine non emprisonnée par le caillot est disponible pour l'activation de plaquette et la migration et la prolifération de cellules de muscle lisse. L'absence d'un chapeau protecteur de fibrine sur l'intima pourrait expliquer la vulnérabilité et l'embolization d'intima. L'Afibrinogenemia apparaît dans cette situation paradoxale comme facteur de risque vasculaire. ( info) |
18/144. corps d'inclusion cytoplasmiques et hépatite minimale : stockage de fibrinogène sans hypofibrinogenemia. Un garçon japonais de 12 ans a eu l'altitude et la fluctuation chroniques des niveaux de transaminase de sérum depuis l'enfance, sans des signes ou des symptômes d'échec de foie. On a éliminé des infections habituelles ou les désordres métaboliques de la considération. Aucun coagulopathy ou anomalie dans des concentrations en plasma des facteurs de coagulation n'a été trouvé. La photomicroscopie des spécimens de biopsie de foie obtenus aux âges 2, 5, et 7 ans a montré le léger désarroi de hepatocyte et le mononucléaire-leucocyte minimal inflammation lobulaire, avec les corps d'inclusion éosinophiles dans le cytoplasme des hepatocytes dans tout le lobule. Ces corps ont souillé avec la technique périodique d'acide-Schiff (PAS) ; le matériel PAS-positif était en partie diastase digestible et sur immunostaining a marqué pour le fibrinogène mais pas pour la álpha-1-antitrypsine. Sur la microscopie électronique de transmission, les corps ont été représentés par le matériel finement granulaire contenu dans des membranes et ont été interprétés en tant qu'à titre d'essai bonnet endoplasmique. Le stockage de fibrinogène peut être manifeste en tant qu'hépatite minimale sans coagulopathy. ( info) |
19/144. Antifibrinogen IgG, fibrinogène, et complexes de Clq circulant dans un proband hypodysfibrinogenemic. Isolement, stoechiométrie, et caractérisation partielle. Des anticorps de circulation d'antifibrinogen ont été rapportés dans les propositi afibrinogenemic rares, se produisant apparemment après thérapie de remplacement de fibrinogène, mais des complexes immuns n'ont pas été décrits. Dans ce rapport nous décrivons circuler les complexes immuns constitués par un antifibrinogen monoclonal IgG dans un hypodysfibrinogenemic hétérozygote (alpha 16 Arg d'A--> ; Proband de Cys). Prévu par l'ordre partiel de protéine et par d'autres analyses, chaque complexe immun s'est composé d'une fibrine (ogen), d'un C1q, et de 3-4 molécules d'IgG. Les complexes étaient cryoprecipitable, une propriété également montrée par des mélanges de proband IgG et fibrinogène normal. Indiquant que les domaines de D et d'E étaient nécessaires pour ce comportement, le cryoprecipitability a été supprimé par la préincubation de l'IgG d'isolement avec ou le fragment normal d'isolement D100 de fibrinogène ou l'E. compatible à l'activité hétérospécifique de l'IgG avec la normale et le fibrinogène de mutant, les résultats suggèrent que l'épitope primaire réside sur un lieu de De sur le polymère de fibrine constitué par les molécules normales et anormales contenant (ou mutant) le peptide uncleaved A. ( info) |
20/144. Une mutation de déphasage dans le gène humain d'Aalpha-chaîne de fibrinogène arrêt de déphasage d'aile du nez (d'Aalpha (499)) menant au dysfibrinogen San Giovanni Rotondo. Nous avons étudié un homme blanc asymptomatique de 53 ans avec les niveaux fonctionnels, mais non immunologiques, de fibrinogène de plasma ainsi que la thrombine prolongée et les temps diminués de reptilase, détectés par des études de coagulation courantes avant un procédé chirurgical. Une nouvelle suppression simple hétérozygote de nucléotide (c) à la position Ala499 dans le gène d'Aalpha-chaîne a été identifiée, qui a prévu des changements des acides aminés correspondants codés par la partie suivante de l'exon V et l'aspect d'un codon non-sens prématuré à la position 518 (arrêt de déphasage d'aile du nez d'Aalpha [499]). Le nouveau fibrinogène dysfonctionnel, variante de San Giovanni Rotondo, a été confirmé in vivo par l'analyse de SDS-PAGE des chaînes chromatographie liquide sous haute pression-épurées de fibrinogène. L'examen de spectre de masse de la crête chromatographie liquide sous haute pression-épurée anormale a donné (56.088 DA) un semblable de masse prévu à cela prévue par l'analyse d'adn du gène muté d'Aalpha-chaîne (56.088 DA) et, après digestion tryptique, l'Aalpha-chaîne tronquée a été montrée seulement dans le propositus, qui a également porté l'Aalpha-chaîne normale. En outre, l'analyse du spectre de masse du sommaire tryptique de la chaîne anormale a confirmé la présence d'une nouvelle et non appariée cystéine à la dernière position qui a été prévue pour former un pont en bisulfure avec de l'albumine sérique humaine. Immuno-épongez l'analyse a confirmé cette variante de San Giovanni Rotondo de fibrinogène, mais fibrinogène non normal. quantités substantielles contenues d'albumine. Les résultats actuels confirment que l'Aalpha-chaîne tronquée manquant d'une partie du domaine terminal peut être incorporée aux molécules mûres de fibrinogène et être normalement sécrétée dans la circulation sanguine. ( info) |